β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱(chēng)：谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名：Micro Glutathione S-transferase （GST）Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0355             產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣       產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：650
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶| GST活性檢測(cè)|試劑盒|微量法 

簡(jiǎn)要介紹：
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)镚ST具有GSH-Px活性，亦稱(chēng)為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 
產(chǎn)品詳細(xì)描述

商品貨號(hào)：	商品品牌：	規(guī)格	基本售價(jià)：	選擇規(guī)格
BC0355- 100管/96樣	Solarbio	100管/96樣	650.00元

產(chǎn)品內(nèi)容： 
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 22mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 2 mL 蒸餾水溶解。

產(chǎn)品說(shuō)明： 
GST 是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST 是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的 重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與 GSH 的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變?yōu)?親水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目 的。因此，GST 在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)?GST 具有 GSH-Px 活性，亦稱(chēng)為 non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如 DNA、蛋白質(zhì)等的功能。 注意，GST 催化的反應(yīng)減少 GSH 含量，但是不增加 GSSG 含量。 GST 催化 GSH 與 CDNB 結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為 340nm；通過(guò)測(cè)定 340nm 波長(zhǎng)處 吸光度上升速率，即可計(jì)算出 GST 活性。
自備儀器和用品： 低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板和蒸餾水。
操作步驟： 
一、粗酶液提?。?
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10 4個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn) 細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）； 然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
二、測(cè)定：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二放在 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動(dòng)物）保溫。
3. 空白管：取微量石英比色皿，加入 20μL 試劑一，180μL 試劑二和 20μL 試劑三，迅速混勻后于 340nm 測(cè)定 10 s 吸光度記 A1，37℃水浴 5min 后，快速取出測(cè)定吸光度記 A2。 4. 測(cè)定管：取微量石英比色皿，加入 20μL 上清液，180μL 試劑二和 20μL 試劑三，迅速混勻后于 340nm 測(cè)定 10 s 吸光度記 A3，37℃水浴 5min 后，快速取出測(cè)定吸光度記 A4。
三、GST 活性計(jì)算： 
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
 活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活 性單位。
GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活性 單位。
GST（U/g 鮮重）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每 10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶 活單位。
GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷500
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫升液體每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活 單位。
GST（U/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷V 樣÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反總：反應(yīng)體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建 議選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量，g；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清 液體積，20μL=0.02 mL；V 樣總：試劑一體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），5min；500：細(xì)胞數(shù)量， 500 萬(wàn)。

b.使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活 性單位。
GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活性 單位。
GST（U/g 鮮重）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每 10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一 個(gè)酶活單位。
GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷500
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫升液體每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè) 酶活單位。
GST（U/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷V 樣÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；
V 反總：反應(yīng)體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建 議選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液 體積，20μL=0.02 mL；V 樣總：試劑一體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），5min；500：細(xì)胞數(shù)量， 500 萬(wàn)。
注意事項(xiàng)： 
1. 樣品處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力；
2. 細(xì)胞中 GST 活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在 300 萬(wàn)-500 萬(wàn)之間，細(xì)胞中 GST 的提取時(shí)可加試劑一后 研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞；
3. 測(cè)定前先用 1～2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如 5min 內(nèi)反應(yīng)不成線性，須對(duì)樣品用蒸餾水稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果乘 以稀釋倍數(shù)；
4. 若樣品測(cè)定吸光度大于 1，建議對(duì)樣品用蒸餾水稀釋?zhuān)?jì)算時(shí)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；
5. 測(cè)定反映的溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響，請(qǐng)控制在 25℃或者 37℃（哺乳動(dòng)物）。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined》 作者:Wensu Han，Yemeng Yang，Jinglin Gao，Dongxiang Zhao，Chengcai Ren，Shijie Wang，Shan ZhaoYihai Zhong 期刊:Ecotoxicology 影響因子:2.46 PMID:30874992
《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影響因子:3.794 PMID:29179148
《Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress》 作者:Le Guan , Muhammad Salman Haider , Nadeem Khan , Maazullah Nasim , Songtao Jiu , Muhammad Fiaz , Xudong Zhu , Kekun Zhang  and Jinggui Fang  期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30545146
《2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells》 作者:Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,Xiang Ji,Yanhua Lu 期刊:Food and Chemical Toxicology 影響因子:3.775 PMID:29626576
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii》 作者:Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,Laihao Li,Yueqi Wang 期刊:Environmental Pollution 影響因子:5.714 PMID:30036838
《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu  期刊:Scientific Reports 影響因子:4.011 PMID:29535326

 

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