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T1320 胰蛋白酶-EDTA消化液

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）和傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶，EDTA，其功能主要是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解，使組織或細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。
胰蛋白酶（Trypsin）簡(jiǎn)稱(chēng)胰酶，是由動(dòng)物豬胰臟中提取的一種蛋白酶制劑。胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架，打開(kāi)細(xì)胞-細(xì)胞，細(xì)胞-基質(zhì)之間的連接從而使細(xì)胞從培養(yǎng)板上脫落下來(lái)并使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞。胰蛋白酶液濃度越高，作用越強(qiáng)，但超過(guò)一定限度會(huì)損傷細(xì)胞。細(xì)胞消化用胰蛋白酶常用的工作濃度為0.25％，pH為7.2-7.4之間，用濾器過(guò)濾除菌。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要*清洗，否則再培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞容易脫壁。
胰蛋白酶液消化時(shí)間：2-10分鐘。用含血清培養(yǎng)液終止其對(duì)細(xì)胞的消化作用。
使用說(shuō)明：1、貼壁細(xì)胞的消化：貼壁細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)成致密單層后，繼續(xù)生長(zhǎng)的空間不足，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成份也消耗較多，同時(shí)代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養(yǎng)，擴(kuò)增、傳代。對(duì)于懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞和貼壁不太緊的細(xì)胞如SP2/0，293等，可直接吹散后分瓶；而對(duì)于貼壁較緊的細(xì)胞如Hela，HepG2，CHO等，則需要以細(xì)胞消化液消化后，才能脫落和分散，擴(kuò)瓶。一般操作過(guò)程為（以下操作均必須嚴(yán)格按無(wú)菌操作的要求進(jìn)行）：
   （1）將長(zhǎng)成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去； 
   （2）加入0.25％胰酶溶液，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定），以使充分浸潤(rùn)； 
   （3）一般消化時(shí)間約為13分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細(xì)胞單層連接成片）轉(zhuǎn)為點(diǎn)狀透明（出現(xiàn)細(xì)小空隙）時(shí)，棄去細(xì)胞消化液，并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化，吹打分散；  
   （4）視實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆秩攵嗥坷^續(xù)培養(yǎng)，一般比例為一傳二到一傳四的。 
2、組織的消化：不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

注意事項(xiàng)：1．由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)具體情況，確定佳消化時(shí)間；消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長(zhǎng)狀況；
2、分裝胰蛋白酶-EDTA消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染；
3、胰蛋白酶-EDTA消化液建議-20℃保存，切忌反復(fù)凍融，
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套進(jìn)行試驗(yàn)操作。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Dexmedetomidine attenuates the neurotoxicity of propofol toward primary hippocampal neurons in vitro via Erk1/2/CREB/BDNF signaling pathways》 作者:Youbing Tu,Yubing Liang,Yong Xiao,Jing Lv,Ruicong Guan,Fei Xiao,Yubo Xie,and Qiang Xiao 期刊:Drug Design, Development and Therapy 影響因子:3.486 PMID:30858699

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