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谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測試劑盒

操作步驟：

一、 粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（10 4個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等體積：直接測定

二、 測定：

1. 分光光度計預熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）保溫。

3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL試劑一，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。

4. 測定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL上清液，180μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后于340nm測定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A3和A4。

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活性檢測試劑盒

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下 (1) 按蛋白濃度計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr (2) 按樣本質(zhì)量計算 活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol/L CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W (3) 按細胞數(shù)量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每10 4個細胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細胞數(shù)量 (4) 按液體體積計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA 蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間（min），5min。 b. 使用96孔板測定的計算公式如下 1) 按蛋白濃度計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(Cpr×V樣)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr 2) 按樣本質(zhì)量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×106×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W 3) 按細胞數(shù)量計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個細胞每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷細胞數(shù)量 4) 按液體體積計算活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1μmol/L CDNB與GSH結(jié)合為一個酶活單位。 GST（U/ml）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V反總÷V樣÷T =0.46×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V反總：反應體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA 蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間（min），5min。

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長為340nm；通過測定340nm波長處吸光度上升速率，即可計算出GST活性。

相關文獻：

《Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined》 作者:Wensu Han，Yemeng Yang，Jinglin Gao，Dongxiang Zhao，Chengcai Ren，Shijie Wang，Shan ZhaoYihai Zhong 期刊:Ecotoxicology 影響因子:2.46 PMID:30874992
《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影響因子:3.794 PMID:29179148
《Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress》 作者:Le Guan , Muhammad Salman Haider , Nadeem Khan , Maazullah Nasim , Songtao Jiu , Muhammad Fiaz , Xudong Zhu , Kekun Zhang  and Jinggui Fang  期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30545146
《2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells》 作者:Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,Xiang Ji,Yanhua Lu 期刊:Food and Chemical Toxicology 影響因子:3.775 PMID:29626576
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii》 作者:Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,Laihao Li,Yueqi Wang 期刊:Environmental Pollution 影響因子:5.714 PMID:30036838
《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu  期刊:Scientific Reports 影響因子:4.011 PMID:29535326
 

北京索萊寶科技有限公司是一家從事生物學試劑及試劑盒的高科技生物企業(yè)。

總部位于北京，并在全國設有經(jīng)銷或代理機構(gòu)。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為完善的售后服務確立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念，擁有專業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量檢測團隊以及的倉儲和物流系統(tǒng)。“Solarbio”已經(jīng)得到全國科研工作者的認可，成為廣大經(jīng)銷商推崇的。

公司擁有一批專業(yè)的研發(fā)人員，我們專注于生物產(chǎn)品的不斷完善和創(chuàng)新。產(chǎn)品覆蓋面廣，品質(zhì)可靠。先后開發(fā)了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、生物醫(yī)學等領域的多種試劑及試劑盒。同時，索萊寶公司提供各種常規(guī)生化試劑，庫存常備產(chǎn)品多達10000多種，可隨時為廣大科研工作者提供各類專業(yè)試劑。在質(zhì)量方面，索萊寶謹記公司信念：質(zhì)量高于一切。所有研發(fā)的產(chǎn)品都設有嚴謹?shù)纳a(chǎn)流程，科學的質(zhì)量檢測方法和成熟的質(zhì)量檢測程序，我們恪守對每一位用戶的承諾：用專業(yè)的態(tài)度做專業(yè)的品牌。同時，公司組建了一支專業(yè)的技術(shù)服務隊伍，能夠為科研工作者提供專業(yè)的技術(shù)服務。每一位購買索萊寶產(chǎn)品的用戶都能夠得到專業(yè)的咨詢和完善的售后服務。

索萊寶公司堅持與接軌，注重和企業(yè)的合作與交流，并提供產(chǎn)品代理、市場咨詢等多項服務。公司將一如既往與世界更多合作，不斷為廣大生物科研工作者提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務。公司理念：“為科研服務，為生命盡責”。一個人能夠走多遠，取決于與誰同行。索萊寶公司期待與各同行精誠合作。 

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